公猪精液质量好坏直接与猪场情期受胎率、产仔数休戚相关，所以猪场再怎么强调公猪精液的重要性都不为过。为研究西南地区高温高湿的应激环境下新胺基维他对种公猪精液质量的影响，选用16头成年种公猪按品种配对分3组，对照组4头，饲喂基础饲粮，2个试验组各6头，分别在基础饲粮中添加新胺基维他营养液10mL/头、20mL/头。结果表明，在高温应激环境条件下，两个试验组精子总数显著增加（P<0.05），精子畸形率极显著降低（P<0.01）。采精频率耐受性试验结果表明，20mL/头新胺基维他组精子总数没有出现显著性减少的变化（P>0.05），而10mL/头新胺基维他组和对照组均极显著降低（P<0.01）。说明在种公猪基础饲粮中添加20mL/头新胺基维他能显著增加公猪精子总数，降低精子畸形率，提高公猪对采精频率的耐受力，延长精液的保存时间。
新胺基维他；精子；高温应激
品种、营养和环境三大因素直接影响一个猪场的经济效益，对于种公猪而言，环境温度是影响其繁殖性能的首要因素。夏天高温导致公猪食欲不振，性欲下降，公猪精液品质下降，如死精、少精、无精等。生产中通过调整饲粮蛋白质和氨基酸水平、提高能量浓度可减少体增热，是克服热应激的有效措施之一[1-2]。
本试验在西南地区高温高湿季节种公猪饲粮中添加一种商品化的抗热应激产品—西班牙海博莱生物大药厂生产的新胺基维他，研究其在高温高湿条件下对公猪精液品质的影响，以减少高温对公猪精子生成和精子活力等造成的不良影响。
一、材料与方法
1.1 试验时间与地点
试验于2014年7—8月在重庆某原种猪场进行，预试期7d，正试期42d。
1.2 试验药品
新胺基维他营养液由西班牙海博莱生物大药厂生产，其主要成分：
1.3 试验设计
选择长白公猪、杜洛克公猪和渝荣系公猪共16头，考虑品种因素将其分成3组，对照组4头，饲喂基础饲粮；2个试验组各6头，分别在基础饲粮中添加新胺基维他营养液10mL/头、20mL/头。基础饲粮采用大型饲料公司生产的全价公猪饲料。试验猪自由饮水，每天上午和下午各清理1次猪舍。试验公猪均是成年且在生产中正常使用的繁殖种公猪。试验开始每周保持正常的1～2次采精频率。猪舍采用西南地区规模化猪场常用的风机-湿帘降温方式，每天观察猪的精神状况，记录猪舍内外温度、湿度。
1.4 样品的收集与处理
试验前样品的收集：饲喂前3组在同一天内进行采精、镜检，2000r/min离心20min，取上清液1mL装于EP管，-20℃冰箱冷冻保存待测。试验至第6周后开始收集饲喂后精液样品（同饲喂前样品收集方法一致）。精液采用BTS稀释后常温保存，比较其保存时间的差异。采精耐受性试验，连续3d保持每天采精1次，第3天收集的精液采用相同方法处理。
1.5 测定指标
参照国家标准GB23238—2009《种猪常温精液》方法测定猪的射精量、颜色气味、精子活力、精子畸形率，精子密度采用血球计数板测量，然后根据射精量与精子密度计算每次射精总精子数。精液收集和检测均由同一经验丰富的技术人员负责；精清生化指标丙二醛（MAD）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、睾酮（T）的含量用北京冬歌博业生物科技有限公司进口分装的ELISA（酶联免疫吸附试验）检测试剂盒，使用分光光度计进行测定。
1.6 统计分析
试验数据用Excel软件处理，用SPSS19.0中的配对t检验进行显著性检验，结果以平均值±标准差表示。
二、结果与分析
2.1 试验期内环境温度
由表1可知，舍外温度平均为31.79℃；猪舍内使用湿帘-风机降温系统，平均温度为29.89℃。舍内比舍外温度低1.9℃。
2.2 新胺基维他对精子总数、活力和畸形率的影响
试验收集期精液的颜色与气味均正常。由表2可以看出，2个试验组饲喂后精子总数显著增加，20mL/头新胺基维他组增加更为明显，而对照组没出现显著变化；精子活力各组饲喂前后差异不显著；精子畸形率，10mL/头新胺基维他组和20mL/头新胺基维他组饲喂后极显著降低，而对照组饲喂前后差异不显著。整体来看，20mL/头新胺基维他组使用效果更好。
2.3 新胺基维他对精液保存时间的影响
试验6周后，分别取20mL/头新胺基维他组和对照组的精液用相同的稀释保存剂处理后，17℃冰箱保存，每12h对精子活力进行检测，其活力都出现显著下降，但20mL/头新胺基维他组比对照组下降趋势要缓慢，见表3。
2.4 新胺基维他对采精频率耐受性的影响
采精频率耐受性试验结果表明，20mL/头新胺基维他组精子总数没有出现显著性变化，而10mL/头新胺基维他组和对照组均出现极显著降低（表4）。
2.5 新胺基维他对精清中生理指标的影响
由表5可知，10mL/头新胺基维他组和20mL/头新胺基维他组精清中的丙二醛含量和天门冬氨酸氨基转移酶活性饲喂后均出现降低，而对照组则升高，但饲喂前后均没有达到显著水平。而精清中睾酮含量3组饲喂后均升高，但没有达到显著水平。
3 讨论与结论
夏季热应激是指动物机体应对高温环境所产生的非特异性应答反应的总和，种公猪皮下脂肪较厚，汗腺功能退化，适宜生活的环境温度为18～24℃，环境温度过高对公猪精液品质影响较大，尤其是高温季节对其影响特别严重，易造成精液品质下降，出现死精和无精。高温使公猪血液中的促肾上腺皮质激素水平升高，垂体前叶促性腺激素减少，促甲状腺分泌减少，从而抑制睾丸产生类固醇，导致公猪的交配欲减退；高温也会使精细胞发生变性，致使精液品质（射精量、活力、畸形率、密度等）降低，从而使种公猪的生产性能受到严重影响，甚至失去生育能力[3]。
张莉等研究发现，持续高温引起的热应激使精子在附睾内的运行与成熟受阻，导致射出精液中总精子数减少，畸形率增高，精液品质下降[4]；韩有元对不同温度下24头杜洛克公猪的生精功能统计，结果显示，温度越高，精液量、精子密度、精子活力越低，精子畸形率则越高[5]。
随着养猪业高度集约化发展，如何缓解夏季猪只（尤其是种公猪）的热应激是当前养猪业亟待解决的重要问题。刘炜等[6]研究表明，湿帘-风机降温系统能够防止公猪热应激，使公猪精液质量保持正常，避免夏季高温对猪场繁殖性能的不利影响。在本试验期间，舍外最高温度达到39℃，但猪舍内采用规模猪场较常规的湿帘-风机降温系统，可以有效减少高温的影响。
维生素是畜体代谢所必需的一类小分子有机化合物，由于其在动物饲粮中所占比重极少，因而其作用往往被忽视，但几乎所有的维生素都对种猪的繁殖性能有影响。高温环境会造成饲粮中某些维生素氧化变质，生物利用率降低。李雪梅等在基础饲粮中每天额外添加4000IU维生素A，结果表明，种公猪的采精量、精子密度提高，精子畸形率降低[7]。
李秋凤在研究饲粮营养调控对哺乳动物养分消化代谢、泌乳及精液品质的影响时发现，维生素A能够清除氧自由基、单线态氧和降低脂质过氧化物的产生。维生素E是维持生殖系统正常结构和功能所必需的物质，通过垂体前叶分泌促性腺激素，调节性机能，从而促进精子的形成与活动[8]。Audet等研究表明，在饲粮中额外添加维生素可以增加精液的产量[9]。
新胺基维他是多种限制性氨基酸和维生素的混合制剂，可以全面高效地补充限制性氨基酸，充分补充关键的维生素A、维生素D3、维生素E、维生素B1和维生素B6，帮助机体对抗各种应激等。
本研究在基础饲粮中分别添加10mL/头和20mL/头新胺基维他营养液6周后，精子总数分别由446.06亿个和461.57亿个增加到584.47亿个和605.92亿个，饲喂前后差异达到了显著水平，并都极显著降低了精子畸形率。
Brzezińska等认为，精子的氧化损伤是多不饱和脂肪酸在活性氧族产生和清除活动不平衡的结果，正常情况下，射出精液中清除活性氧族作用的能力依赖于精浆的抗氧化物质[2]。丙二醛是机体产生的氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成的过氧化物。丙二醛含量的高低间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度[10]。曾新斌在夏季高温猪饲粮中添加牡蛎粗多糖发现，其对精液抗氧化指标和种公猪的生精功能有明显改善作用，丙二醛含量极显著降低（P<0.01）[11]。睾酮是睾丸间质细胞分泌的维持精子发生的主要激素之一，由间质细胞分泌，并经淋巴循环扩散到曲细精管、附睾与输精管等部位。褚晓红等研究表明，饲粮中添加硒、维生素E能够提高猪精液中睾酮含量，并对公猪精子密度和活力有促进作用[12]。
本试验10mL/头新胺基维他组和20mL/头新胺基维他组丙二醛含量和天门冬氨酸氨基转移酶活性均降低，反应了精子细胞受自由基攻击程度降低，精子质量提高，而对照组出现了升高，但均没用达到显著性水平，表明饲喂新胺基维他后精液抗氧化指标和种公猪的生精功能有改善作用。
成年公猪使用中，每周采精次数一般不能超过3次，如果使用过频会出现射精量减少，畸形率增高，造成精子受精力下降，如果再继续使用，则出现采出的精液无精子现象。阮的乐等研究公猪采精频率对公猪精液质量的影响，结果发现，公猪如果长期连续每2d采1次精会造成34.6%的精液活力在0.7以下[13]。本试验发现，20mL/头新胺基维他组连续3d每天采精1次的公猪，其第3天精子总数没有出现显著性下降，而对照组和10mL/头新胺基维他组均出现极显著降低。本试验还发现，20mL/头新胺基维他组和对照组虽然在常温保存过程中精子活力都在下降，但其活力降低的速度更缓慢。
本试验表明，在公猪基础饲粮中添加20mL/头新胺基维他能显著增加公猪精子总数；降低精子畸形率；提高公猪对采精频率的耐受力；延长精液的保存时间。
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