作为疾病监测和监控系统的手段之一的采样,其样品是采自一部分猪群,通过它们来估计整个猪群的疾病发生频率(或检测整个猪群是否发生疾病)。评估监测和监控系统的有效性来自几个特定的指标,包括:
检测爆发的时间:可以通过增加取样频率(例如每天、每周或每月)来获取。
检测受猪群数量水平的限制:可以通过增加样本大小(如30个样品检测疾病患病率样本量≥10%群体)。
检测的准确性:取决于试验猪群敏感性和特异性。
因此,优化监测方案做到快速、实用、经济、有效。传统的采样方法一般是个体抽样(例如个体血液样本),这耗时耗钱,而且需要专业技能,并且在疾病流行率低时不能有效地检测到相关指标。
本专栏的目的是描述使用基于处理液的采样监测繁殖群的猪繁殖和呼吸综合征病毒。为了达到这个目的,我们将处理液定义为由仔猪去势和断尾过程中产生的组织渗出物组成的复合样品(图1)。
爱荷华州立大学
图1:从新生仔猪获得处理液的指南:1.清洗桶套塑料袋;2.稀纱布放置在桶口上固定,以保证组织中的流体顺利通过塑料袋;3.收集组织;4-5.收集后取出组织;6.塑料袋回收处理液;7.处理液从塑料袋输送到无菌管中。
为了描述使用处理液样品监测繁殖群的PRRS病毒,我们比较了使用这种采样方法对比使用采集30份血清的常规方法,它们的处理时间上的不同,另外包括对比30头猪断尾的尾巴拭子。要做到这一点,无论是哪种方法收集的样品都必须来自同一天相同的猪群。
我们在实习基地收集的处理液样本来自商品母猪群(这些母猪正积极进行蓝耳病病毒监测),并比较各处理液样品与30份血清或30份猪尾巴拭子,至于是血清还是猪尾巴拭子取决于兽医的选择。这些样品来自同一天相同的猪群。这就是我们所说的“样本匹配”。我们还通过ELASA测试了处理液抗蓝耳病毒抗体,并提交样品进行ORF-5 测序。所有样品在爱荷华州立大学兽医诊断实验室进行测试。
结果
我们小组做了初步的试验工作,在2017爱荷华州立大学杰姆斯麦基恩猪病会议上作了演讲报告,已经证明相对比30份血清或30份猪尾巴拭子来说,处理液样本经PCR检测蓝耳病毒RNA具有较高灵敏度(猪PRRSV阳性的检测能力更强),这些样本都分成五组。处理液对PRRSV的总检出频率为66%(32个样品中有21个阳性),而对应的个体样本(血清和尾部血拭子)对这个病毒的检测率较低,只有31%(32个S组中有10个阳性)。PRRSV的血清和猪尾巴拭子在总样本中的检测频率为7%(192个总样本检测出13个阳性)。在所有采样尝试中,处理液的收集成功率为100%,并且农场人员容易完成。每次试验处理液的回收量足以执行多个诊断测试。
此外,我们已经能够从83%的样品(18个样品中的15个)获得PRRSV序列,这也支持了这样一个假设:在田间条件下从正在进行病毒清除的农场获得的处理液,其存在较高的PRRSV RNA量并且RNA的量是相对稳定的。
此外,我们还可以通过ELISA检测抗PRRSV抗体,通过PCR检测处理液中的PCV2 DNA数量,这表明该样品可用于诊断/临床应用。
我们建议处理液冷藏或冷冻后不久收集,唾液收集遵循类似的方法。在 ISU进行的前期工作表明PCR灵敏度不差,样品在4摄氏度(冰箱的温度)下储存了五天,和/或经过了一个冻融期。
启示
正在进行的田间研究其初步结果支持这样一个结论:每次样品从最多700头仔猪中获取处理液是快速、实用和实惠的。这样就可以像日常一样频繁地监测PRRSV以及其他传染病,这样就可以以相对低的成本显著地提高传染病监测频率。
我们通过处理液的方式获得样品,可以使得采样频率增加,样品采自的猪只数量增加(甚至采自所有猪只)。我们可以在一次采集的样品中进行测试,因此我们能够开发出先进的监测系统:在传染病极低流行率的情况下进行监测的系统。
因此,处理液的采样是一种简单、实用、快速、有效地筛选PRRSV群的方法。正在进行病毒清除的农场可以使用处理液来了解PRRSV阴性猪何时生产出来。PRRSV持续感染(阳性处理液)将提醒农场管理人员和员工进行有效的生物安全管理,以阻止病毒循环并避免在猪群内进一步传播。同理,阴性处理液也让生产者和兽医觉得监测是必要的,比如:启动监控断奶仔猪唾液(NHF日报的后续专栏将提供这种方法)或其他方式,可以充分保证断奶仔猪从母猪场转运之前确实是阴性的。