杭州贝尔塔在2011-2012年PED的爆发的机缘下一战成名,同时,贝尔塔在腹泻爆发的期间积累了大量实际数据,终于把诊断工作一点点推入大众的视野,成为在腹泻诊断、防控领域的业界权威之一。
李龙:重视后备母猪才能防控好腹泻
杭州贝尔塔实验室成立于2011年。创始人李龙2006年本硕博毕业于浙江大学动物科学学院,读研期间开始走猪兽医临床的道路。毕业后进入诺华从事临床工作,之后前往美国攻读博士后,学习美国的临床方法。在多年临床工作过程中,李龙意识到做兽医服务没有诊断支持很多事情是不行的,因此回国之后在导师的支持下成立贝尔塔实验室致力于诊断工作。
杭州贝尔塔实验室创始人 李龙
杭州贝尔塔是在农业部备案的合法的私人诊断实验室,目前拥有三大业务板块:研发诊断、临床兽医和产品服务,以及猪场管理咨询;拥有实验室团队17人,服务团队30人,合作猪场生产团队60人。口号“为猪代言”,以提高猪群健康度条生产率为目的,做不受主观因素影响的猪病诊断。
贝尔塔参与证明“美国与中国流行的PED的高度同源”研究结论的中国部分,文章由nature杂志报道,发表人因此成为兽医领域第一个国家青年千人计划。同时拥有提高圆环病毒的培养滴度的方法、PEDV的IgA和IgG的试剂盒、唾液诊断方法应用等6项国家发明专利,并且获得国家中小企业创新基金。
后备母猪和低胎龄的母猪是腹泻多发的群体,也腹泻防控中的关键和难点,记者记者就后备母猪腹泻控制和预警方面问题采访了杭州贝尔塔实验室的负责人李龙博士。
记者:为什么说控制腹泻最重要的是对后备母猪的控制?
李龙:因为后备母猪是猪场发生腹泻的关键点,往往猪场发腹泻都是从后备母猪和低胎龄母猪开始的。
记者:为什么腹泻会先发在后备和低胎龄母猪所产的仔猪身上?
李龙:关于这个问题,目前有了明确的观点,后备和低胎龄母猪发病,其所产仔猪损失惨重只是表象,真正的原因在于这些母猪群体对PEDV的免疫状态。母猪的免疫状态,决定了其所产仔猪能获得的保护力,从而决定仔猪发病风险。
因此其本质上并不是低胎龄母猪首先发生PED,而是那种低免疫水平状态下的母猪易发生PED。实验数据分析,没有发病的母猪的IgA水平要明显高于发病的母猪,发生腹泻与母猪IgA抗体水平数据的相关性可达98-99%。
记者:是什么保护了我们的仔猪受PEDV感染而不发病?
李龙:对PEDV来说病毒感染小肠上皮细胞,那么保护抗体必须存在于小肠当中,或者黏附在小肠上皮之上,而不是被吸收到循环系统中去,才能中和小肠中的病原,阻止PEDV感染。
抗体从母乳中来,其中IgG过胃效应差,假设需要5个IgG才能起到中和作用,那么仔猪需要吃进去的IgG就要有10000个,也就是说如果母猪奶水中能含有一万个IgG抗体,那么也能起到有效保护作用,但事实上要达到这个高度是很难的。而IgA过胃效应就要好很多,假设需要10个IgA能起到保护作用,那么母猪奶水里可能只需要1000个或者200个就够了。以上并不是一个准确的数字,只是体现一个数量级关系,用来说明在母乳中起到保护仔猪不受PED感染的抗体主要是IgA。
另外我们还希望这个有效的抗体在整个哺乳期都存在,是常乳抗体而不是初乳抗体。但实际上研究显示常乳中IgA比起初乳中下降大概5-10倍左右,IgG则下降100倍。
记者:有没有方法去检测母猪的IgA抗体水平?
李龙:使用间接ELISA。
记者:那么母猪IgA水平达到多少能将腹泻降低到一定比例之下呢?
李龙:以每窝猪发生腹泻的日龄为单位,对应母猪的IgA抗体S/P值做一个数据模型。一般来说小猪10天左右才发病可以认为是安全的,那么此时对应的母猪IgA抗体S/P值在0.25左右。
然后通过大量的数据综合,S/P> 0.25的母猪群在75%以上,其场腹泻爆发的风险大约在10%左右。
实际上猪场的母猪免疫水平是在逐年提高的。根据我们实验室检测样品S/P>0.25的合格率数据,在2014年只有45%-50%左右,到了2015年达到60%-65%左右,而2016年在75%以上。今年以浙江为例,发生腹泻的猪场只占我们检测猪场数量的4%,说明我们的工作是有成效的。
记者:为什么检测血清中的IgA而不直接检测母乳中的IgA?检测血清IgA相对于乳汁中的IgA有怎样的优势?
李龙:一方面,我们的实验数据和美国爱荷华州立大学的实验数据,都表明血清中的抗体,与临床保护相关,我们更早证明了是与IgA的相关最高。
初乳中的IgA水平与临床保护相关性非常高,但是由于初乳表示猪已经出生了,万一情况不好,留给猪场加以改进的时间非常有限了;而检测血清抗体随时都可以,这样留给猪场采取措施的时间比较充裕。
记者:那么是不是说,检测出母猪血清IgA S/P值就能有效预警猪场是否会发生腹泻?大于0.25就不会有重大腹泻损失了?
李龙:做了疫苗的情况下基本上母猪都能大于0.25,但除了母猪的免疫情况,腹泻的发病与猪场感染程度也有关。目前来说在仔猪有病毒载量和发病程度的对应标准,即新生仔猪小肠或粪便中检测PED拷贝数≤10是安全的,在0~10^4之间判断为有明显临床表现,拷贝数>10^4是严重临床表现。但对于整个猪场来说,还没有完整的模型来规定猪场里病毒载量达到多少会导致发病。
记者:有没有综合感染程度和母猪IgA水平二者做的发病风险评估数据?
李龙:还没有。
记者:以上所说的IgA抗体水平S/P值大于0.25的母猪群体达到75%,则发病风险可降低至10%,或者母猪IgA抗体S/P值大于0.25则仔猪发病可推迟至10日龄的结论是否有经过临床证实?
李龙:通过对母猪IgA抗体水平检测所预测的发病风险,模型上与临床的吻合程度可达95%,但我们还希望能找一些发病的猪场来做这类实验进行验证。