副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪上呼吸道的一种常在细菌。这种细菌在环境中普遍存在,世界各地都有,甚至是健康的猪群当中也能发现。在特定的条件下可引起严重的全身性疾病,其主要特征是以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主,该病原引起的疾病又被称为革拉氏病(Glasser's disease)。
 

　　随着世界养猪业,规模化、区域化、集中化的发展及高度密集饲养模式技术的应用，以及突发新的呼吸道综合征等因素存在，使得该病日趋流行,危害日渐严重,已逐渐演变为一种世界范围内流行的重要疾病。
 

　　副猪嗜血杆菌 历史来源
 

　　1910年，德国科学家K.Glasser首次报道了猪的浆液性纤维素性胸膜炎、心包炎以及脑膜炎患猪的浆液性分泌物中存在一种革兰氏阴性杆菌，并发现了这种革兰氏阴性菌和猪多发性浆膜炎、多发性关节炎之间存在一定联系。
 

　　1922年，Schermer和Ehrlic首次分离得到这种革兰氏阴性细小杆菌，在显微镜下观察成多形态，非溶血，不运动。
 

　　1931年，Lewis在研究猪流感时发现了这一细菌与猪流感的发生联系紧密，并对革拉氏病的病原菌进行了早期生化鉴定，结果表明该菌与猪嗜血杆菌非常相似，在生长中都需要X(铁叶琳)和V(烟酸胺腺嘿吟二核普酸)两种因子，所以在当时建议将该菌命名为流感嗜血杆菌。
 

　　1943年，Hjarre和Wramby经过研究将此菌命名为猪嗜血杆菌。
 

　　1969年，Biberstein和White的研究表明副猪嗜血杆菌的生长只需要V因子。根据国际公认的使用“Para-''作为前缀为生长不需要X因子参与的微生物命名的原则，提出“副猪嗜血杆菌”(Haemophilus parasuis)命名为这一种新的细菌名称。
 

　　副猪嗜血杆菌 病原特性
 

　　在伯杰氏细菌分类手册中，副猪嗜血杆菌隶属于巴斯德菌科嗜血杆菌属，是一种非溶血性、无运动性、依赖NAD、细小的革兰氏阴性杆菌。具有多形性，呈逗点状、棒状、丝状及不同形态的杆状。另报道在鸡胚绒毛尿囊膜上生长时，副猪嗜血杆菌可形成丝状形态，并产生菌毛样结构。
 

　　HPS无芽孢，部分菌株通常具有荚膜，在1986年Mororumi和Nicolet报道了具有荚膜的HPS大多分离自健康猪上呼吸道，而无荚膜的HPS则多数从其它部位分离到。2006年，国内Jin H等研究了15个不同血清型的参考株和80个临床分离株副猪嗜血杆菌的生物被膜，结果表明大约43%的菌株在聚苯烯平板上有不同程度的生物被膜形成能力，没有生物被膜形成能力的副猪嗜血杆菌通过体内传代也不能形成生物膜。无毒力菌株比有毒力菌株表现出更高程度的生物被膜形成能力，且在培养基上培养时生物被膜不会受影响。人工感染猪鼻腔中的分离株仍有生物被膜存在，而肺脏和大脑的分离株没有形成生物被膜的能力。
 

　　HPS对营养要求严格，该菌生长时严格需要烟酞胺腺镖吟二核昔酸(NAD或V因子)，而不需要血红素和其它叶琳类物质(X因子)。V因子存在于血液及某些植物组织中，在细菌的呼吸中起递氢作用。实验室使用的含羊红细胞的血琼脂中含有X因子及V因子，但血液中的V因子通常处于被抑制状态，V因子依赖性的嗜血杆菌通常不能在含有完整红细胞的羊血琼脂上生长。当血液加热后，细胞膜上的抑制物被破坏，V因子释放后的新鲜血液才能生长。所以在实验室分离HPS时通常使用巧克力琼脂培养基，即鲜血琼脂加热80℃～90 ℃,5～15 min 。但HPS在巧克力培养基上生长困难。HPS在适宜的培养基上生长的菌落呈圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、灰白色半透明的针尖大小的菌落。菌落的大小可因菌株和培养基的营养程度不同而异。如果与金黄色葡萄球菌划线共培养，可见到靠近葡萄球菌菌落的HPS。生长良好，菌落较大，菌落直径可达1~2mm，而远离葡萄球菌菌落的HPS菌落较小，这种现象称为“卫星现象”。因为葡萄球菌周围琼脂中溶解的红细胞可提供X因子，而葡萄球菌本身在生长时分泌V因子，释放到培养基中，从而促进HPS的生长。
 

　　HPS的生化反应较弱,对糖类发酵多不稳定,发酵葡萄糖、蔗糖,不发酵甘露糖、木糖、L-阿拉伯糖、蜜三糖,少数菌株发酵乳糖。鸟氨酸脱竣酶、精氨酸双水解酶及叫垛试验为阴性;氧化酶阳性和接触酶试验呈阳性。
 

　　HPS对环境敏感，在外界环境中的死亡速度非常快。其无芽抱，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌;最适生长温度35～37℃,pH 7.6～7.8。HPS在试验中接种用的培养基和稀释介质可能对HPS的活力产生影响。Morozumi和Hiramune等研究了不同温度条件下副猪嗜血杆菌在生理盐水和PBS中的存活能力。当HPS存在于生理盐水中42 ℃1 h,37℃2h及25℃8 h，即不能检测到HPS活菌;5℃8 h,HPS的浓度轻微下降;当HPS置于PBS中时，也观察到相似的结果。Reilly和Niven等研究了胰蛋白陈-酵母提取物肉汤作为攻毒接种用的培养介质，发现处于生长稳定期的HPS继续培养后，活性显著降低。另有研究报道，HPS培养大约10h后向培养基中补充外源性神经氨酸可使细菌的终浓度高于没有补充外源性神经氨酸的细菌的终浓度，这表明在细菌的培养过程中需外源性神经氨酸。
 

　　副猪嗜血杆菌 血清分型
 

　　血清型分型方法在传统上主要是基于热稳定可溶性抗原和琼脂凝胶沉淀实验。目前为止通过血清分型方法可以将副猪嗜血杆菌鉴定划分为至少15种血清型,各血清型菌株在毒力方面有着较大的差异。但是大约还有20%的菌株到目前为止用此方法还不能分型。研究报道表明在日本,德国、美国以血清4型和5型是主要流行的优势血清型。而在澳大利亚副猪嗜血杆菌的优势血清型主要是5型和13型。在巴西的主要流行血清型是4型,5型,14型。在加拿大,副猪嗜血杆菌的优势血清型也是4型和5型。在中国,副猪嗜血杆菌的优势血清型为4型，5型, 13型。国内有研究者证实目前副猪嗜血杆菌流行毒株为血清5型和血清4型为优势血清型，其他型占的比例较小。