（一）临床综合诊断
本病发生于寒冷季节，多侵害幼龄动物。突然发生水样腹泻，发病率高而病死率一般较低，主要病变一般在小肠，根据这些特点，可以作出初步诊断。但是，轮状病毒病要与猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和仔猪黄痢、白痢区别，因此进行实验室检查是必要的。
（二）实验室诊断
1．病原学检查
(j)电镜检查：是常用的诊断法。将粪便提取液经超速离心浓缩，沉淀物用磷钨酸负染直接观察。直接电镜法检查粪样中的病毒粒子时，要求粪样中含108 /mL病毒粒子才可获得阳性结果。因此，应收集发病初期的腹泻粪样，其含毒量较高，易于检出。
(2)病毒分离：可用MA-104、CV-I、ST等传代细胞或猪、牛肾原代细胞等分离病毒。若粪便标本先用胰蛋白酶处理( 10-20tcg/mL)，可提高病毒的分离率。若仍不能适应细胞培养，则可将粪样抽提浓缩后感染剥夺初乳的同源动物1-2代，以提高适应细胞培养的成功率。
(3)聚丙烯酰胺凝胶电泳法：是目前较常用的方法。利用轮状病毒基因组分为1 1个片段的特征，直接从待检粪样重提取病毒核酸，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAE)，硝酸银染色，观察其特征性图谱。此法尚可区分人和动物的轮状病毒。
此外，反向间接血凝法、乳胶凝集试验、免疫荧光法等亦常应用。
随着分子生物学新方法的不断涌现，核酸探针杂交技术、
